核酸藥物憑借其獨-特的技術(shù)特點成為近年來新藥研發(fā)領(lǐng)域關(guān)注的焦點。核酸藥物包括小干擾RNA(siRNA)、反義寡核苷酸(ASO)、微小RNA(miRNA)、小激活RNA(saRNA)、信使RNA(mRNA)、適配體(aptamer)和抗體核酸偶聯(lián)藥物等,是基因治療的一種形式。其中siRNA藥物作為核酸藥物研發(fā)的熱點,憑借基因沉默效率高、不良反應(yīng)可控、合成方便等優(yōu)點,在新藥研發(fā)領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用,有望成為繼小分子和抗體藥物后最有希望開發(fā)出新藥的藥物。
一、SiRNA藥物作用機制
小干擾RNA(Small interfering RNA,siRNA)又稱為沉默RNA、短干擾RNA或非編碼RNA,是一類長度在21~25bp的短雙鏈RNA分子。合成的siRNA通過胞吞作用進入細(xì)胞中,隨后少量的siRNA能夠從溶酶體中逃逸進入細(xì)胞質(zhì),進入細(xì)胞質(zhì)后,siRNA 被合并到 RNA誘導(dǎo)的基因沉默復(fù)合物中(RNA-induced silencing complex,RISC),隨后siRNA分離成兩條單鏈:正義鏈(sense strand)和反義鏈(antisense strand),之后正義鏈被剪切在細(xì)胞質(zhì)中降解,而結(jié)合反義鏈的RISC被活化并且特異性地結(jié)合靶mRNA并切斷靶mRNA,引發(fā)靶mRNA的降解,從而阻斷靶蛋白的翻譯。
圖1 SiRNA作用機制
(圖片來源:Eur J Pharmacol.2021;905:174178)
二、SiRNA藥物代謝研究策略
SiRNA藥物在體內(nèi)主要被血漿和組織中廣泛存在的核酸內(nèi)切酶和核酸外切酶所代謝,而不是通過肝臟的Ⅰ相和Ⅱ相代謝酶代謝。目前上市的siRNA藥物經(jīng)過結(jié)構(gòu)改造后,在血液循環(huán)中較少被代謝。通常絕大部分siRNA藥物被肝臟迅速攝取,小部分分布在其他組織,在肝臟或其他組織中經(jīng)由核酸酶代謝。對于siRNA藥物體內(nèi)代謝研究,通常是對動物體內(nèi)的血漿、尿液、糞便及靶向組織(肝或腎等)進行代謝產(chǎn)物鑒定和定量生物分析。
然而在藥物早期篩選階段,化合物數(shù)量很多,動物體內(nèi)試驗周期較長,成本很高,很難通過體內(nèi)試驗大批量進行化合物篩選或結(jié)構(gòu)優(yōu)化。因此,合適的體外代謝研究對于siRNA藥物的早期篩選尤為重要。體外代謝研究具有通量大,實驗周期短等優(yōu)勢,更有助于我們提高對于siRNA藥物的篩選速率。表1所示為常用的siRNA藥物的體外代謝研究體系。
表1 siRNA藥物的體外代謝研究體系
基質(zhì) | 適用范圍 |
血清/血漿 | 評估siRNA藥物在血液循環(huán)系統(tǒng)中的代謝穩(wěn)定性情況,一般是體外siRNA藥物的必檢項。 |
肝S9 | 含有肝組織中大部分酶且容易獲取,一定程度上可以代替肝組織勻漿使用。 |
肝組織勻漿 | 酶體系比較全面,推薦用于siRNA藥物的體外篩選評價。 |
肝細(xì)胞 | 酶體系最為完善,適用于肝靶向的siRNA藥物代謝評價。 |
溶酶體 | 溶酶體是siRNA藥物通過胞吞進入細(xì)胞后的主要接觸的環(huán)境,具有豐富的酶體系,包括核酸酶和各種水解酶等,是siRNA代謝的重要場所,是研究siRNA藥物代謝穩(wěn)定性的高效實驗體系。 |
三、IPHASE相關(guān)產(chǎn)品
為滿足客戶對于siRNA藥物體外代謝研究的需求,IPHASE作為體外研究生物試劑引-領(lǐng)者,憑借先進的設(shè)備,專業(yè)的技術(shù)人員和多年研發(fā)的經(jīng)驗,開發(fā)出來多種用于siRNA藥物體外代謝研究的產(chǎn)品,助力廣大客戶進行siRNA藥物早期篩選研究。
合規(guī)性
生產(chǎn)產(chǎn)品的組織均由正規(guī)渠道獲得,來源清晰。
安全性
生產(chǎn)人員及動物均經(jīng)過傳染源檢測,保證產(chǎn)品質(zhì)量安全。
純度高
細(xì)胞純度可達到90%以上。
活率高
細(xì)胞活率可達85%以上,滿足客戶需求。
復(fù)蘇率高
凍存復(fù)蘇率可達90%以上。
可定制
可根據(jù)客戶特殊需求,提供特殊種屬、特殊組織細(xì)胞的定制服務(wù)。
以下為IPHASE部分產(chǎn)品列表
類別 | 分類 |
亞細(xì)胞組分 | 肝溶酶體 |
酸化肝勻漿液 | |
肝/腸/腎/肺S9 | |
肝/腸/腎/肺微粒體 | |
肝/腸/腎/肺胞質(zhì)液 | |
原代肝細(xì)胞 | 懸浮肝細(xì)胞 |
貼壁肝細(xì)胞 | |
專屬血漿 | 血漿穩(wěn)定性 |
血漿蛋白結(jié)合 |
IPHASE/匯智和源憑借多年的研發(fā)經(jīng)驗,推出了多領(lǐng)域、多種類的高-端科研試劑,為藥物早期研發(fā)提供篩選工具,為生命科學(xué)領(lǐng)域的探索提供新材料、新方法和新手段,為食品、藥品、化學(xué)品等的遺傳毒性研究提供便捷產(chǎn)品,望廣大科研工作者咨詢。
發(fā) 文 章 得 獎 勵
凡使用本公司產(chǎn)品,在國內(nèi)及國際刊物上發(fā)表論文(論文發(fā)表日起一年內(nèi)),并注明產(chǎn)品屬于IPHASE BIOSCIENCES CO,LTD / 匯智和源生物技術(shù)(蘇州)有限公司所有,即可申請獎勵。根據(jù)發(fā)表刊物影響因子不同,給予不同金額獎品:
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